线性PEI MAX 40K转染说明书 |
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线性PEI MAX 40K转染说明书 化学名:线性聚乙烯亚胺,线性PEI,聚乙烯亚胺,线性,MW 40000,转染级 线性聚乙烯亚胺 分子量40000
订货号#: 78PEI40000 规格:100mg 500mg 5g 品牌:BIOHUB CAS#: 49553-93-7 分子量: 40,000(~22,000自由基) 溶于:水 不溶于:常用有机溶剂(乙醇,丙酮,四氢呋口南) 外观:白色至灰白色自由流动的固体 处理:手套和通风橱 储存:在室温下避光干燥储存 PEI MAX 40K(在游离碱中也称为PEI 22K)是一种功能强大,值得信赖且经济实惠的瞬时转染试剂。在HEK293和CHO大多数表达系统中,PEI MAX都能提供稳定的高表达(96孔板至100L生物反应器)。现在每年有更多的研究人员和公司来使用PEI MAX进行细胞转染,因为相对于大多数转染试剂而言 PEI MAX既能等到稳定的高表达又能使转染成本降低少40%。 PEI MAX 比更PEI 25K易于使用,并且比PEI 25K有更高的转染效率,通常PEI 25K转染过程通常需要几个小时才能完成准备,而PEI MAX 40K可在两小时内完成整个转染过程。另外,PEI 25K含有4-11%的残留丙酰基,这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合,而PEI MAX 40K的丙酰基*脱落,意味着PEI MAX每批产品的性能更加稳定。 PEI 25K(KE1075)和PEI MAX 40K(KE1098)的比较
配置:1:称取100mg PEI MAX,加新鲜的细胞级别的水90ml,搅拌溶解。 2:调整pH值至7.0 ,定容至100ml,用0.22um的滤器过滤,分装后储存于4℃,保质期可以达到12个月。 转染操作流程: ◆ 瞬时转染方法 1. 接种细胞: 转染前一天,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。 2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。 3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染 1.5 h 后,添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。 4. 孵育细胞和分析结果: 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后 5 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合检测时间。
◆ 稳定转染方法 1. 接种细胞: 转染前一天,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。 2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。 3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染 1.5 h 后,添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。 4. 孵育细胞和分析结果: 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h 即可检测到转入基因的表达。 5. 转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释 10 倍 以上),在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。 „ 特别提醒 1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞,在转染前两天铺板可显著 提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为 70~80%。 2. 对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。 3. 即使在有蛋白(如 10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是 DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用 Opti-MEM ITM 培养基以达到宜转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。 4. 对大多数细胞来而言,每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI MAX转染试剂都能获得较高转染效率。使用 者也可尝试每 1 μg DNA 使用 1.5~4 μL 体积线性PEI MAX转染试剂进行优化。 5.本手册只是一个基本操作手册,具体转染过程中需要根据实验进行优化,优化方向为混合时间,转染时间,DNA混合比列 6.PEI MAX(MW 40,000) 为Polysciences公司生产的化合物产品,每批产品出厂前都经过严格的检测,保证每批产品都*、稳定且高品质,但由于作为转染试剂使用过程中有很多实验室因素(配置方法,PH,水纯度,称量的准度,dna RNA纯度,细胞状态,细胞品系…)造成溶解出现问题或者转染效率出现差异,所以厂家只受理该产品纯度,分子量及重量缺失破损等相关投诉,针对极个别客户溶解问题和转染效率问题我们只能友善解决,所以不能保证您能获得满意答复,对于产品产品转染效率不高,转染批间有差异,转染不了等问题,不作为评价我们售后工作的依据。如果我们提供的PEI手册都无法解答您的问题,建议您可以多看文献,多调整一下转染条件,找出适合自己细胞的转染方法。如果无暇摸索条件,您也可以直接购买我们配置好细胞转染液,这样免去您很多烦恼,谢谢理解
转染试剂和DNA配比数据 细胞型号 培养基 每孔细胞数 DNA的量 转染试剂量 和培养基混合 4-6h 293H DMEM 3×104 0.2µg 0.6µL DMEM+10%FBS 293FT DMEM 3×104 0.2µg 0.6µL DMEM+10%FBS 293E DMEM 3×104 0.2µg 0.6µL DMEM+10%FBS 293F DMEM 3×104 0.2µg 0.6µL DMEM+10%FBS COS7 DMEM 1.5×104 0.4µg 0.6µL DMEM+10%FBS hela DMEM 2×104 0.3µg 0.6µL 1640+15%FBS Caco2 MEM 3.5×104 0.3µg 0.9µL MEM+10%FBS BHK21 MEM 2×104 0.2µg 0.6µL MEM+10%FBS CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×104 0.5µg 0.6µL DMEM+HT+pro +10%FBS RAW264.7 DMEM 3×104 0.2µg 0.6µL DMEM +10%FBS MCF7 MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat 2×104 0.1µg 0.3µL MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat+10%FBS SW480 IMDM 3×104 0.4µg 0.6µL IMDM +10%FBS MDCK DMEM 4×104 0.6µg 1.2µL DMEM+10%FBS CHO-K1 IMDM+Pro 3×104 0.2µg 0.6µL IMDM+Pro +10%FBS HepG2 DMEM 3×104 0.5µg 0.9µL DMEM+10%FBS A549 DMEM 2×104 0.3µg 0.6µL DMEM+10%FBS NIH/3T3 DMEM 1.5×104 0.1µg 0.9µL DMEM+10%FBS vero DMEM 3×104 0.3µg 0.9µL DMEM+10%FBS sf9 SIM SF 5×104 0.4µg 0.9µL SIM SF+10%FBS
转染效率 细胞种类 中文名称 PEI 转染效率 HEK293 人胚肾细胞 90%-95% 293-T 人胚肾细胞 90%-95% CHO-K1 仓鼠卵巢细胞 80%-90% U251 人源神经胶质瘤细胞 80%-90% Hela 人源宫颈癌细胞 70%-80% COS7 猴SV40转化肾细胞 70%-80% HepG2 人源肝癌细胞 70%-80% NIH/3T3 小鼠胚胎成纤维细胞 60%-70% 胶质瘤干细胞 人源胶质瘤干细胞 60%-70% Patu8988 人源胰腺癌细胞 60%-70% U2OS 人源骨肉瘤细胞 60%-70%
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